评估肿瘤特异性DARPin毒素融合蛋白在自体移植前用于体外清除人类卵巢皮质组织碎片中的肿瘤转移

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研究问题：使用肿瘤特异性设计的锚蛋白重复蛋白（DARPin）-毒素融合蛋白，在不损害卵巢组织的情况下，是否有可能从卵巢皮质清除癌细胞？

简要回答：通过抑制蛋白质合成，肿瘤靶向的DARPin毒素融合蛋白可以在体外清除实验诱导的乳腺癌肿瘤病灶中的卵巢皮质。

众所周知：卵巢组织冷冻保存和自体移植是癌症患者恢复生育能力的一项成功技术。该手术并非没有风险，因为移植物中可能仍存在恶性细胞。检测癌细胞的程序使组织碎片无法用于自体移植。为了避免这一问题，如卵泡的体外成熟或人工卵巢的构建等策略正在进行中，但仍处于实验阶段。或者，我们已经证明，在用维替泊芬治疗后，通过消除横纹肌肉瘤，体外净化卵巢皮质是可能的。这允许在自体移植前对皮质碎片进行治疗，而不会损害卵巢组织的完整性。

研究设计、大小、持续时间：将携带乳腺癌肿瘤病灶的人卵巢皮质碎片暴露于融合到铜绿假单胞菌外毒素A（达平毒素融合蛋白）易位和催化结构域的达平24小时，该外毒素A（达平毒素融合蛋白）靶向EpCAM或HER2。用达平毒素融合蛋白治疗后，组织再培养6天，以使任何剩余的肿瘤细胞形成病灶。此外，清洗后分析卵巢组织的功能完整性。

参与者/材料、设置、方法：将表达不同水平EpCAM和HER2的乳腺癌细胞系导入人卵巢组织形成肿瘤灶。在用DARPin毒素融合蛋白清除后，用（免疫）组织化学和RT-qPCR分析组织中是否存在任何残留的癌细胞。通过（免疫）组织学、卵泡活力测定和小卵泡体外生长能力测定来确定对卵巢皮质和卵泡活力可能产生的有害影响。

主要结果和偶然性的作用：在使用EpCAM靶向DARPin毒素融合蛋白治疗后，含有EpCAM阳性乳腺癌细胞的卵巢皮质显示肿瘤病灶数量显著减少。尽管暴露于EpCAM特异性DARPin对卵泡的形态或活力没有影响，但在体外生长实验后观察到卵母细胞活力下降，可能是由于卵母细胞上EpCAM的低水平表达。与EpCAM特异性的DARPin毒素融合蛋白相比，靶向HER2的DARPin毒素融合蛋白对卵泡的形态、活力或体外生长没有不利影响，而HER2阳性乳腺癌细胞的病灶受到严重影响，如凋亡小体的存在所示，肿瘤细胞残留和缺乏活的肿瘤细胞。用HER2特异性DARPin毒素融合蛋白净化后的组织学结果经RT-qPCR证实，显示卵巢皮质组织中HER2 mRNA的基础水平降低。

局限性，谨慎理由：达平毒素融合蛋白的作用在很大程度上取决于其靶点在癌细胞上的表达。卵巢皮质不应表达目标蛋白，因为这可能导致组织损伤。治疗后卵巢皮质的功能完整性需要在体内进一步研究。

研究结果的更广泛意义：通过达平毒素融合蛋白靶向肿瘤特异性表面表达抗原，可以在不损害卵巢组织的情况下清除卵巢皮质转移瘤。用DARPin毒素融合蛋白清除卵巢皮质组织，为在表达肿瘤特异性表面标记物的恶性肿瘤中通过自体移植防止肿瘤再次复发提供了一种可行的治疗策略。

试用注册号：不适用