人工卵母细胞：从体细胞到可育幼崽

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研究问题：我们分析了使用来自两个小鼠品系（B6D2F1和FVB）的体细胞（SCs）生成人工卵母细胞的效果，并跟踪了它们在植入前/植入后的完整发育。

简要回答：新菌株（FVB）产生的人工卵母细胞具有较高的受精率，而标准菌株（B6D2F1）产生的人工卵母细胞提供了扩张的囊胚和可育的幼崽。

已知情况：B6D2F1是一种受欢迎的杂交小鼠品系，由于其基因/表型的一致性和高卵母细胞产量和质量，可用于克隆和转基因创造。事实上，B6D2F1卵母细胞具有独特的中期II（MII）纺锤体复合体，使其成为产生用于SC核移植（SCNT）的成卵细胞的理想候选者。然而，由于它们缺乏遗传变异，它们不太适合于相互SCNT研究。相比之下，FVB小鼠的每个染色体上都有单核苷酸多态性和INDEL，这有助于追踪后代的系谱。

研究设计、规模、持续时间：在3个月的时间内，共进行了10个实验，使用30只受刺激的小鼠。从FVB和B6D2F1小鼠的卵丘中提取SCs。将两个菌株的SCs注射到去核的MII B6D2F1卵母细胞中。未经处理的B6D2F1卵母细胞进行压电ICSI受精，作为对照。比较了单倍体化、受精和完全植入前发育的发生率。将部分囊胚移植到假妊娠CD-1小鼠体内获得后代。

参与者/材料，地点，方法：卵母细胞去核在Oosight可视化和细胞松弛素B暴露下进行。将FVB或B6D2F1 SC转移到卵母细胞与仙台病毒的卵黄周间隙以促进融合。通过人工授精后假减数分裂纺锤体的形成以及假极体的挤出来监测单倍体化。概念培养在一个时间推移成像系统，压电ICSI控制。将扩张的囊胚转移到假妊娠小鼠的子宫角。后代交配以测试其生育能力。

主要结果和机会的作用：选择直径<10mm的G0期FVB（n=278）和B6D2F1（n=905）SCs进行SCNT，并转移到去核的B6D2F1卵母细胞中。1212个卵母细胞的去核率为97.6%。FVB和B6D2F1 SCNT的存活率相似，分别为100%和98.5%。通过SCNT后2小时假减数分裂纺锤体的存在确定的成功单倍体化也具有可比性，FVB的比例为59.9%，B6D2F1的比例为63.7%。压电ICSI后的存活率在FVB-和B6D2F1重组卵母细胞之间也具有可比性，分别为64.3%和60.3%，尽管低于对照组（75.2%，P<0.00001）。FVB胚胎的受精率为88.7%，与对照合子的受精率85.8%相当，而B6D2F1胚胎的受精率较低（70.8%，P<0.00001）。FVB-和B6D2F1衍生胚胎的囊胚率分别为15.1%和24.0%，而对照组为80.7%（P<0.00001）。9个B6D2F1衍生囊胚的全基因组核型分析证实其中5个样本为真倍体。将FVB囊胚（N=8）和B6D2F1囊胚（N=81）转移到假怀孕小鼠体内，仅从B6D2F1胚胎中产生3个可育后代。

局限性和谨慎的原因：这仍然是有限的观察数量，并且幼崽仅来自B6D2F1菌株。利用具有较高遗传变异的菌株可能有助于后代指纹识别。

研究结果的更广泛含义：这项研究证明了产生人工基因型概念的能力，产生活的后代。鉴定一个可行的供体细胞，以及优化细胞周期阶段和植入后发育的标准化，将有助于促进这项技术在年龄相关性不孕或卵巢储备不足夫妇中的人类生殖。

试用注册号：不适用