人子宫内膜基质细胞体外蜕膜化过程中脂肪酸的降解

人子宫内膜基质细胞体外蜕膜化过程中脂肪酸的降解（⬅点击左侧文字观看视频）

研究问题：参与脂肪酸降解的β-氧化途径的活性是否在人子宫内膜基质细胞（HESC）体外蜕膜化过程中发生改变？

简要回答：脂肪酸转运体的表达水平表明，在人胚胎干细胞体外蜕膜化过程中，线粒体β-氧化途径的活性增加。

已知的是：子宫内膜间质细胞（ESC）的分化，称为蜕膜化，对母胎间期的正确形成至关重要。蜕膜化的一个重要特征是葡萄糖消耗增加。在子宫内膜中，葡萄糖通过葡萄糖转运蛋白（GLUT）并入ESC。脂肪酸是活细胞中另一种重要的能量来源。脂肪酸通过肉碱棕榈酰转移酶1和2（CPT1和2）运输到线粒体，并通过β-氧化途径降解。据描述，CPT1的抑制影响ESC蜕膜化。然而，目前尚不清楚蜕膜化过程中脂肪酸降解的转变是否发生了改变。

研究设计、规模、持续时间：本研究采用原代人胚胎干细胞进行。在获得书面知情同意（伦理委员会批准的方案编号S-239/2005）后，从健康定期骑自行车的妇女（33.6±2.2岁）获得子宫内膜活检（增殖中晚期）。用蜕膜化鸡尾酒（含有：醋酸甲羟孕酮、雌二醇和8-溴环磷酸腺苷）体外蜕膜化人胚胎干细胞（D）6天。非蜕膜化（ND）对照组用溶媒溶液处理。收集细胞培养上清液和细胞提取物，以评估蛋白质/基因表达和代谢物含量。

参与者/材料，环境，方法：通过测量细胞培养上清液（mU/l）中的催乳素（PRL）蛋白水平来评估蜕膜化。实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测GLUT1、CPT1A和CPT2 mRNA表达水平的变化。采用ΔΔCt法进行分析（内部对照：RPLP0）（与ND细胞相比，D细胞中的折叠变化-FC-）。通过电喷雾串联质谱（ESI-MS/MS）（总蛋白的nmol/mg）评估酰基胡萝卜素的含量。N=5，平均值±SEM。统计分析采用配对t检验。

主要结果和偶然性的作用：蜕膜化混合物处理的人胚胎干细胞与ND细胞相比，细胞培养上清液中PRL蛋白水平显著升高（ND16.80±0.73μl；d684.20±219.80mu/l，*p<0.05）。这一结果证实了蜕膜化鸡尾酒体外处理后人胚胎干细胞的蜕膜化状态。此外，与ND细胞相比，D组GLUT1的mRNA表达水平高度上调（FC 10.02±2.90，***p<0.001），这与蜕膜化的葡萄糖消耗增加特征一致。在确认人胚胎干细胞蜕膜化状态后，评估CPTA1和CPT2的mRNA表达水平。与ND细胞相比，D组两种脂肪酸转运蛋白的mRNA表达水平均上调（CPTA1:FC 1.84±0.44，**p<0.01；CPT2:FC 2.04±0.49，**p<0.01）。最后，评估了脂肪酸β-氧化降解的中间代谢物不同酰基卡尼汀的含量水平。与ND细胞相比，D细胞中乙酰-（C2）和丁酰-（C4）酰基的浓度降低[（C2:ND 1.37±0.10 nmol/mg总蛋白；d1.06±0.20nmol/mg总蛋白，*p<0.05），（C4:nd0.03±0.01nmol/mg总蛋白；D 0.01±0.00 nmol/mg总蛋白，*p<0.05）]。D细胞和ND细胞提取液中其他中间酰基卡尼汀的含量水平无差异（p>0.05）。

局限性、谨慎理由：本研究采用蜕膜化鸡尾酒处理的原代人胚胎干细胞在体外进行。活细胞内不同代谢途径的相互联系非常复杂。有必要进行进一步研究，以确定蜕膜化过程中相关代谢途径是否使用线粒体β-氧化途径的不同中间代谢产物。

研究结果的更广泛含义：能量代谢的调节及其与其他重要细胞内代谢途径的相互联系对细胞功能非常重要。我们的结果有助于强调蜕膜化过程中调节脂肪酸降解的重要性。对人胚胎干细胞代谢的进一步了解有助于改善妇女健康。

试用注册号：不适用