未经促排卵获得的未成熟卵母细胞体外成熟培养后行卵母细胞质内单精子注射并胚胎移植后分娩

1例从未经促排卵刺激的多囊卵巢综合征(PCOS)患者的卵巢中获取未成熟卵母细胞,于体外成熟培养(IVM )后行卵母细胞质内单精子注射(ICSI),并胚胎移植成功,获临床妊娠并分娩一足月健康婴儿,系国内首例。

一、病例报告

患者 26岁，16岁初潮,月经稀发,原发不孕 2年。患者基础血清卵泡刺激素(FSH)7.6U/L黄体生成激素(LH)14.9U/L睾酮 2.4 mol/L;B型超声检查显示,双侧卵巢呈多囊状改变,诊断为PCOS 经氯米芬促排卵3个周期无反应,采用复方醋酸环丙孕酮(商品名:达因35)治疗2个周期,上述激素仍无明显下降。经肌内注射黄体酮,每天20mg连续3d于撤退出血后第10天(即月经干净后第4天),经阴道超声引导下行卵巢小卵泡穿刺术。

术前检测每侧卵巢中沿皮质分布的卵泡,其中直径7~9mm的4个5~7mm的 2个<5mm的5个;抽取两侧卵巢含有血性的卵泡液共3ml其中含有未成熟卵母细胞7个。获得患者知情同意后,对未成熟卵母细胞行IVM，将卵母细胞放入IVM 体系，TCM培养液(美国 Sina公司产品)+20%胎牛血清(杭州四季青公司产品)+0.075UMl FSH+0.1U/ml人绒毛膜促性腺激素(hcG,瑞士 Semno公司产品)十表皮生长因子 10 ng/ l(美国 Sima公司产品)，7个未成熟卵母细胞在 37℃、5%6 C0,及饱和湿度培养箱内培养 48h对达第二次减数分裂中期(MI)的6个未成熟卵母细胞行ICSI(患者丈夫精液经常规梯度离心处理)与10卵裂液(美国Signa公司产品)于37℃、5%C02及饱和湿度培养箱内培养，18h后发现有5个未成熟卵母细胞正常受精且发生卵裂,在行ICSI后第 2天,共有 3个优质胚胎发育并进行胚胎移植,移植前对胚胎行激光辅助孵化。在取后36h开始对患者行激素治疗,给予戊酸雌二醇4mg/d肌内注射黄体酮80mg/d 胚胎移植后2周尿妊娠试验阳性,血清 hCG538. U/L,继续激素治疗直至妊娠 70d 胚胎移植后 4周行B型超声检查,可见宫内有孕囊且胎心搏动正常，患者妊娠期顺利至38周,于2004年8月24日分娩一足月健康女婴。

二、讨论

1.IVM技术及应用概况:近年来,有关辅助生育技术的基础理论研究不断深入,生殖医学发展十分迅速，体外受精 胚胎移植(IVF-FET)在为部分不孕夫妇获得健康下一代的同时,也带来了一些问题,如促排卵的药物费用高、存在发生卵巢过度刺激综合征(OHSS)的危险等。而IVM技术则可以避免上述问题的发生。IVM是将生殖泡(geminalvesirbGV)期或GV前期的卵母细胞在体外进行培养,在达到IVM期后能够正常受精、发育及着床,即从未经促排卵刺激的卵巢中获取的未成熟卵母细胞,可在体外发育成熟。1983年，Veeck等首次报道了对自 IVF刺激周期所得到的未成熟卵母细胞进行体外发育成熟,受精后行胚胎移植并妊娠，自20世纪 90年代起,国外先后报道了自手术切除的卵巢和PCOS患者卵巢的未成熟卵泡中获取未成熟卵母细胞,在体外培养成熟、受精、形成胚胎及行胚胎移植后成功，国内早在1998年,吴际等[2]在IVF刺激周期,对取卵所得到的未成熟卵母细胞进行离体培养至成熟,但未进行胚胎移植，目前,国内各大生殖医学中心均采用低剂量的促性腺激素进行促排卵,即使是极少数未应用促排卵药物,但最终在取卵前均使用了 hCG，本研究报道的1例患者是从未使用任何药物刺激的,PCOS患者卵巢中获得未成熟卵母细胞,经体外培养成熟后行胚胎移植,获得妊娠及分娩成功。

2.IVM的临床意义:获取足够数量的未成熟卵母细胞,是作为可供胚胎选择的一个前提条件,以及其对于提高IVM的成功率具有特别重要的意义。有研究证明,多囊卵巢(PCOS)或PCOS患者,比卵巢正常的妇女能获得更多的未成熟卵。而且她们在接受外源性促性腺激素治疗时,容易出现卵巢无反应或OHSS、因此，PCO或PCOS患者是IVM理想的研究对象。进行IVM,除了治疗周期短、费用低的优势外,最大的优势在于可避免促排卵引发OHSS 可避免因促排卵引起的一些不良后果,包括发生卵巢上皮性癌、深静脉栓塞等的危险性;并可结合体外受精治疗不孕症;同时可作为卵子库的来源之一;并且可以解决因卵巢恶性病变需切除卵巢或需要放疗或化疗的年轻未生育患者的后顾之忧。

IVM的临床妊娠率仍较低,徘徊在20%~35%,主要可能与获卵数不足、细胞质未完全成熟导致胚胎发育不良、体外培养过程卵子的透明带硬化等因素有关。本例系PCOS患者,获得的未成熟卵母细胞的数量相对较多,又因未经任何药物刺激,细胞质和细胞核的成熟更趋同步性,而且采用 ICSI并于胚胎移植前行激光辅助孵化,这些因素可能与本例患者最终能获得成功有关。

IVM技术为当今辅助生育领域中较被重视的技术之一,尽管其尚不够完善,但它的应用不仅解决了诸如PCOS患者的体内卵子成熟障碍的问题,拓宽了治疗不孕症的思路,并为研究人类卵子的发生和发育机制,提供了重要的理论依据。